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快速测定食用植物油中胆固醇含量

发布日期: 2018-08-17
浏览次数: 38

胆固醇常存在于动物源性食物中,也是人体内许多重要活性物质的合成材料。过多食用胆固醇会形成高血脂症,引发动脉粥样硬化,进而诱发高血压、冠心病等一系列心脑血管疾病[1。餐厨废油脂中的地沟油、潲水油是多种动、植物油脂的混合物, 其中含有大量的动物油脂,而动物油脂中普遍含有胆固醇,而食用植物油中一般不含或含有极少量的胆固醇。因此,可以通过检测食用植物油中的胆固醇含量来判定其中是否含有动物油脂,从而推断该食用植物油是否混有地沟油。

     目前,胆固醇的测定方法主要有比色法、薄层层析法、气相色谱法、酶法及高效液相色谱法等2比色法存在着操作繁琐,测量结果误差大、重现性差等问题;薄层层析法所用的固定相粒度大,传质扩散慢,柱效低,分离能力差,只能进行简单混合物的分离;气相色谱法需要内标物,或者将不皂化物酰化衍生化才能有准确的结果;酶法技术要求较高, 不适于作为常规方法3。美国 FDA 推荐用直接皂化法处理样品,采用 HPLC 法测定胆固醇,目前该法常用于细胞、血清及胆固醇氧化产物的测定,但用于植物油中胆固醇的测定较少,因为采用皂化法植物性油脂会产生假阳性反应,原因是植物性油脂中甾醇类物质会参与皂化反应。笔者通过简化样品前处理过程,直接用无水乙醇作为溶剂溶解食用植物油,经滤膜过滤后,用高效液相色谱法快速测定其胆固醇含量,旨在为质监部门辨别食用植物油中是否掺有地沟油提供一种准确、简便而快速的方法。

实验部分

1.1 主要仪器与试剂

高效液相色谱仪:Agilent 1100 型,配 DAD 外检测器,美国安捷伦公司;

无水乙醇、甲醇、乙腈:色谱纯,美国 TEDIA

司;胆固醇标准品

胆固醇标准溶液:1 mgmL, 准确称取 0.1 g 胆固醇标准品,用无水乙醇溶解定容至 100 mL

滤膜:0.22 μm,有机相。

1.1 色谱条件

色谱柱:Diamonsil C18  色谱柱250 mm×4.6  mm 5 μm;流动相:甲醇,流速为 1.0 mLmin ;柱温:

38℃;进样量:10 μL ;测定波长:208 nm

1.2 样品前处理

称取油样约 1  g(精确至 0.1  mg),用无水乙醇溶解并定容于 50 mL 容量瓶中,经 0.22 μm 有机滤膜过滤后,供 HPLC 检测分析。

结果与讨论

2.1 油样溶解

分别称取 0.51.01.52.02.5  g 大豆油样品,用无水乙醇溶解并定容于 50 mL 容量瓶中,结果发现,0.51.0  g 油样溶解良好,而 1.52.02.5  g 油样均出现不同程度的乳浊现象。这表明油样在无水乙醇中有一定的溶解度,以 50 mL 无水乙醇中溶解 1 g 油样为宜。

2.2 流动相的选择

分别以甲醇、甲醇 水、乙腈、乙腈 水为流动相进行条件优化。结果显示,甲醇或乙腈可以使胆固醇快速出峰,保留时间短,分离效果好;而当流动相中甲醇或乙腈的比例降低时,胆固醇出峰慢,保留时间延长,且与干扰杂质一起流出,分离效果差。由于乙腈具有挥发性强、毒性大、成本高等特点,实验采用甲醇作为流动相。

2.3 检测波长的选择

对胆固醇标准溶液进行扫描,确定在 205 nm 有最大吸收峰。但试验发现,选择 205 nm 为测定波长时,胆固醇标样和油样的基线均不平,且易发生漂移,而甲醇在 205 nm 略有吸收,故选择 208 nm 测定波长。试验表明,选择208 nm 作为测定波长时, 胆固醇标样和油样的基线平稳,无漂移现象。尽管选择 208 nm 作为测定波长可造成峰值的降低,但对已知浓度样品的测定结果表明,选择 208 nm 没有很大影响。

2.4 线性方程与检出限

对胆固醇标准溶液逐级稀释后,配制浓度分别 0.10.20.30.51.0  mgmL 的系列标准工作溶液,并进行 HPLC 测定。以色谱峰面积 A 对胆固醇浓度 cmgL进行线性回归,得线性方程为A=3 320.517 37c-2.558 719 5,相 r=0.999 9

根据对添加低浓度水平的胆固醇样品的测定,以 3

倍信噪比计算方法的检出限为 50 mgL

1.1 加标回收率和测量精密度

称取两种已知胆固醇含量的植物油样品各

1.0  g,分别进行 0.20.30.5  mg 的胆固醇加标回收试验,试验结果列于表 1。由表 1 可见,3 种水平的加标回收率在 91.5%101.4% 之间,测定结果的相对标准偏差为 2.12%4.15%,符合食品检验分析要求。空白油样和加标油样的色谱图分别见图1、图2

快速测定食用植物油中胆固醇含量

快速测定食用植物油中胆固醇含量

结语

利用胆固醇和食用植物油易溶于无水乙醇的特性,用无水乙醇直接溶解油样,滤膜过滤后用高效液相色谱法测定其中胆固醇的含量,测定结果准确可靠。该法省去了繁琐的皂化前处理过程,操作简单、快速,为判定食用植物油中是否含有动物油脂, 进而判断植物油是否混有餐饮废弃油脂提供依据。

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